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本制品是一种用于表达N端同时含有His标签(His tag)和SUMO标签(SUMO tag)双标签的目的蛋白的原核表达质粒。His标签有利于通过亲和层析方法进行目的蛋白的纯化，而SUMO标签则有利于改善目的蛋白的折叠，增加目的蛋白可溶性和产量。表达后的含有目的蛋白的融合蛋白可以通过PreScission蛋白酶(货号：YT982)酶切去除His标签但保留SUMO标签，也可以通过SUMO Protease (货号：YTB4022)酶切去除N端的His和SUMO两个标签。本质粒为卡那霉素抗性。

如果通过无缝克隆技术在SUMO标签酶切位点后插入目的蛋白ATG起始的序列，SUMO Protease酶切后，可以确保表达的目的蛋白氨基端(N端)刚好从甲硫氨酸(Methione)开始，不会增加或减少任何一个氨基酸，实现目的蛋白的完美正确表达。

本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和SUMO双标签的目的蛋白。

本载体在N端His标签后含有PreScission Protease识别的八肽序列LEVLFQGP，因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease酶切除去N端的His标签，但在SUMO融合蛋白的N端还会保留两个额外的氨基酸GP。在用SUMO Protease酶切除去SUMO标签的时候，SUMO Protease识别的是SUMO蛋白的空间结构，通过无缝克隆的方式在CAGATTGGTGGA (对应氨基酸为QIGG)序列后插入目的蛋白的基因序列，在用SUMO Protease进行酶切的时候，其正好在QIGG后产生酶切，因此可以产生不带任何额外氨基酸的目的蛋白，而这是很多做蛋白结构和功能研究的研究人员所梦寐以求的。

可以采用如His-tag Purification Resin(耐还原螯合型，货号：YT616)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型，货号YT046)以及His-tag Purification Resin(变性剂耐受型，货号：YTB4204)/His标签蛋白纯化试剂盒(变性剂耐受型，货号：YTB046)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用His-tag抗体(货号：YT789)检测或少量分离纯化目的蛋白。

• pET-N-His-PreScission-SUMO中没有的酶切位点包括：
  

  AatII	Acc65I	AgeI	AhdI	AscI	AvrII	BaeI
  BbvCI	BfuAI	BmgBI	BsaI	BseRI	BsiWI	BspMI
  BsrGI	BstBI	Bsu36I	CspCI	EcoRV	FseI	KpnI
  MfeI	MscI	NcoI	PacI	PmeI	PmlI	PstI
  RsrII	SacII	SbfI	ScaI	SexAI	SfiI	SnaBI
  SpeI	SrfI	StuI	SwaI	ZraI

  
  
• pET-N-His-PreScission-SUMO中的单酶切位点包括：
  

  AflII	C`TTAA,G	5336		NmeAIII	GCCGAG(N)19,NN`	4041
  AleI	CACNN|NNGTG	5483		NotI	GC`GGCC,GC	5473
  AlwNI	GAG,NNN`CTG	1729		NruI	TCG|CGA	1286
  AsiSI	GCG,AT`CGC	943		PaeR7I	C`TCGA,G	5481
  BamHI	G`GATC,C	5442		PciI	A`CATG,T	2141
  Bg1I	GCCN,NNN`NGGC	3182		PflFI	GACN`N,NGTC	2399
  Bg1II	A`GATC,T	5251		PpuMI	RG`GWC,CY	3136
  BmtI	G,CTAG`C	5145		PshAI	GACNN|NNGTC	3401
  BspQI	GCTCTTCN`NNN,	2258		PsiI	TTA|TAA	370
  BssHII	G`CGCG,C	3831		PspXI	VC`TCGA,GB	5481
  BssSI	C`ACGA,G	1968		PvuI	CG,AT`CG	943
  BstAPI	GCAN,NNN`NTGC	4563		SacI	G,AGCT`C	5460
  BstEII	G`GTNAC,C	4060		SalI	G`TCGA,C	5448
  BstZ17I	GTA|TAC	2374		SapI	GCTCTTCN`NNN,	2258
  DraI	TTT|AAA	5227		SgrAI	CR`CCGG,YG	4923
  DraIII	CAC,NNN`GTG	242		SmaI	CCC|GGG	1069
  EagI	C`GGCC,G	5473		SphI	G,CATG`C	4771
  Eco53kI	GAG|CTC	5462		StyI	C`CWWG,G	5564
  EcoRI	G`AATT,C	5454		TspMI	C`CCGG,G	1067
  FspI	TGC|GCA	3164		Tth111I	GACN`N,NGTC	2399
  HindIII	A`AGCT,T	5466		XbaI	T`CTAG,A	5034
  HpaI	GTT|AAC	3740		XhoI	C`TCGA,G	5481
  MluI	A`CGCG,T	4242		XmaI	C`CCGG,G	1067
  NheI	G`CTAG,C	5145

• 首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
  
• 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μL，共1mL。可以直接用于酶切或者转染细胞。
  
• pET-N-His-PreScission-SUMO质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，或者也可以同无缝克隆技术在SUMO标签之后插入目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株进行表达纯化。